毛细管电泳纯度分析(CE-SDS)的原理是什么?所用的试剂都是什么作用?
毛细管电泳纯度分析(Capillary Electrophoresis, CE)是一种基于电泳原理的分离技术,通过在狭窄的毛细管中施加高电压,根据分子在电场中的迁移速率进行分离。在CE-SDS(毛细管电泳-SDS-PAGE,Capillary Electrophoresis-Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis)中,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳技术被引入到毛细管电泳系统中,以实现对蛋白质样品的分离和纯度分析。
一、CE-SDS的原理包括以下几个方面:
1.电泳分离:
在高电压的作用下,不同电荷密度和大小的蛋白质分子在凝胶中以不同的速率迁移,从而实现分离。
2.SDS作用:
SDS(十二烷基硫酸钠)是一种阴离子表面活性剂,用于蛋白质样品处理。SDS与蛋白质发生结合,使蛋白质呈线性展开并带有负电荷。这样,蛋白质的迁移速率主要受分子大小影响,而不受原生电荷的影响。
3.聚丙烯酰胺凝胶:
聚丙烯酰胺凝胶作为毛细管电泳中的填充介质,对蛋白质分子的迁移起到筛选作用。分子量较小的蛋白质在凝胶孔隙中迁移较快,而分子量较大的蛋白质迁移较慢。
二、CE-SDS实验中常用的试剂及其作用如下:
1.SDS(十二烷基硫酸钠):
用于与蛋白质结合,使其带负电荷,并使蛋白质呈线性状态,便于电泳分离。
2.电泳缓冲液:
提供电解质环境,保持毛细管内外的电场均匀,同时影响蛋白质的迁移速率。
3.尿素:
可改变蛋白质-SDS复合物的迁移速率,提高分离效果。
4.沉淀剂(如乙醇、丙酮):
用于去除样品中的杂质和低分子量成分,提高纯度。
5.甲醇:
用于改变毛细管的电泳环境,降低蛋白质吸附。
6.染料(如染蓝R250):
用于对蛋白质样品进行染色,便于检测。
CE-SDS是一种高效、高分辨率的蛋白质分析技术。它结合了毛细管电泳的高分辨率和SDS的蛋白质变性作用,使得不同大小和形状的蛋白质能够在短时间内实现有效分离。CE-SDS在生物技术、药物研发、生物制药等领域有着广泛应用。
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