肝脏组织此前置于液氮保温桶中保存，但未及时处理，今天才发现。请问目前仍可用于蛋白提取吗？

一般情况下，仍然可以用于蛋白提取，前提是该肝组织在液氮保温桶中始终保持深度低温（接近 -196 °C）且未发生融化/反复冻融。液氮条件下蛋白酶与磷酸酶活性基本被“冻结”，对总蛋白回收与多数下游检测通常影响很小。

一、需要先判断的关键点（决定“能不能用/能用到什么程度”）

1、是否有融化迹象或冻融历史

若样本曾出现软化、表面潮湿、结霜融水、离开液氮后明显“回温”、或不确定是否经历过冻融：总蛋白仍可能提取，但降解风险上升，尤其影响低丰度蛋白、蛋白修饰（如磷酸化）、以及长条带/大分子蛋白的完整性。

2、保存方式

• 整块组织通常比匀浆/裂解液状态更稳定。

• 若组织已切碎、且装管不严导致吸潮结冰，也会增加后续处理的变异。

3、下游目的

• WB检测丰度较高的结构/代谢蛋白：通常可用。

• 磷酸化/乙酰化等PTM、蛋白互作（Co-IP）、定量蛋白组学：对冻融和微量降解更敏感，需要更严格质控。

二、建议的最小化风险操作

1、全程低温快速处理：取样、称量、剪碎/研磨都尽量在液氮或干冰上完成，避免“半融化”。

2、使用强抑制体系：裂解液中加入蛋白酶抑制剂 + 磷酸酶抑制剂（若做PTM必加）。

3、优先选择机械破碎：液氮研磨成粉后再加裂解液，减少局部升温时间。

4、分装避免二次冻融：提取后的蛋白按一次用量分装，-80 °C保存。

三、提取后快速质控

1、BCA/Bradford：确认总量是否异常偏低。

2、SDS-PAGE考马斯染色或WB内参（GAPDH/ACTB/Tubulin）：看是否出现明显“拖尾/低分子涂抹”提示降解。

3、如做磷酸化：跑一个已知磷酸化标志蛋白或用p-Ser/Thr/Tyr抗体做整体评估。

四、结论与可执行建议

1、若确认样本一直在液氮中、未融化：可以按常规方案进行蛋白提取，成功概率很高。

2、若可能发生过融化/冻融：仍可提取，但建议把该样本作为“风险样本”处理，务必做上述电泳/内参质控；若用于定量蛋白组或PTM研究，建议谨慎解释结果或尽量更换样本。

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