请问在进行 SDS-PAGE 时，如果蛋白浓度较低、上样后无法观察到条带，应如何对样品进行浓缩处理？

针对SDS-PAGE中蛋白浓度较低、上样后无法观察到条带的问题，需根据样品特性选择合适的浓缩方法。常用策略如下：

一、超滤浓缩（Ultrafiltration） —— 推荐优先考虑

原理：利用分子量截断（MWCO）膜在离心力作用下去除小分子溶剂，仅保留蛋白。

操作建议：

1、选择合适MWCO（一般取比目标蛋白分子量小3-5倍的滤膜）。

2、使用离心式浓缩管（如Amicon Ultra等）。

3、控制离心力和时间，避免样品干涸或蛋白变性。

4、浓缩后可用适量上样缓冲液定容至适合上样体积。

5、如含高盐或干扰物质，可配合缓冲液置换（buffer exchange）以提升条带质量。

二、TCA/丙酮沉淀法（Trichloroacetic Acid Precipitation） —— 适用于样品稀释度高、水相体积大

操作步骤：

1、加入等体积10-20% TCA（最终浓度5-10%）。

2、4°C孵育30-60 min。

3、12000-15000 rpm离心10-15 min，弃上清。

4、用冰冷丙酮洗涤沉淀1-2次（去除盐分）。

5、风干沉淀，加入SDS-PAGE样品缓冲液充分溶解。

注意事项：

1、此方法可能导致蛋白变性或难溶，尤其对膜蛋白或疏水性蛋白不适。

2、操作中避免丢失沉淀，必要时可添加载体蛋白（如glycogen）辅助沉淀。

三、冻干浓缩（Lyophilization） —— 非首选，仅在体积过大、无快速离心设备时考虑

适合可耐冻干的蛋白质样本，但操作周期长，且易造成蛋白构象损伤，不推荐用于需保持活性或天然构象的样本。

四、补充建议

1、如条带信号仍弱，需确认是否因上样缓冲液配置不当、变性/还原不充分、电泳体系问题等非浓度因素引起。

2、建议尝试上样量阶梯梯度（如5-20 μg）进行初步判断。

3、如样品为复杂体系（如组织裂解液），可配合蛋白定量（如BCA）后再决定浓缩倍数。

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