ip是阴性的两个蛋白，用甲醛能体内交联能交联到瞬时的相互作用吗？

甲醛（formaldehyde）作为一种常用的可逆交联剂，主要作用机制是通过与氨基、巯基和羟基等基团反应形成亚甲基桥（-CH₂-），从而将空间上接近的分子交联固定。因此其交联范围和效率受限于分子间距离与接触时间。

分析如下：

1、“IP是阴性”两个蛋白是否有相互作用？

若免疫共沉淀（IP）结果为阴性，但怀疑存在瞬时或弱相互作用，不能排除真实存在，只说明其亲和力低或不稳定，在裂解及洗脱过程中解离。

2、甲醛是否能捕捉瞬时相互作用？

一定条件下，甲醛可捕捉到瞬时或弱相互作用，但有以下几个关键前提：

• 交联前蛋白在细胞内空间上需足够接近（<2 Å–3 Å）

• 交联反应时间和浓度需优化（一般0.5%–1%甲醛，室温或37℃，处理10–15 min）

• 作用需发生在细胞内天然状态（即在裂解前完成交联）

3、技术注意事项：

• 使用甲醛交联后再做IP时，推荐搭配交联兼容性裂解液，如含SDS的裂解系统，并在裂解后进行剪切染色质或超声处理，以充分破坏细胞结构释放复合物。

• 若目标相互作用极其瞬时/弱，建议考虑更高空间分辨率的交联剂组合，如 DSP（可裂解交联剂）+ FA组合使用，或采用BioID、APEX2等原位标记方法进一步验证。

总结：

甲醛可在体内交联中捕捉一定程度的瞬时或弱蛋白相互作用，但效率依赖于相互作用的空间接近程度和交联条件的优化。IP阴性不能完全排除相互作用，建议结合交联-IP实验及其他方法验证。

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