请问用液相测出浓度后,怎么计算样品纯度呢?
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使用HPLC检测样品中各组分;
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检测器响应对不同组分近似一致(如使用UV检测器,且目标物与杂质具有相似吸收);
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不涉及外标浓度定量,仅用于判断目标组分的纯度百分比。
一、常规HPLC法测定纯度(面积归一化法)
适用条件:
计算方式:
纯度(%)= 100 ×(目标峰面积之和)÷(所有样品峰面积之和)
二、结合标准曲线浓度法计算纯度
若你已使用标准曲线计算了目标物的绝对浓度(如 μg/mL),可进一步计算纯度,但需满足两个前提:
1、样品为单一目标物为主的混合物(非复杂基质);
2、已知样品总质量或理论总浓度。
计算方式一:已知总质量时
纯度(%)= 100 × 目标物质量 ÷ 样品总质量
计算方式二:溶液中浓度法(较少用)
纯度(%)= 100 × 目标物浓度 ÷ 总溶质浓度
此法要求能准确获得“总浓度”,通常用于标准品或有明确理论含量的样品。
三、建议与补充说明
1、若使用DAD/PDA等光谱型检测器,建议配合紫外全谱查看杂质性质,辅助确认是否可采用面积归一法。
2、对于高纯样品,亦可结合LC-MS确认目标峰身份,避免误将共流出杂质计入目标峰面积。
3、若样品为粗提物、天然产物提取物等,推荐采用LC-MS配合定性+峰面积法更可靠。
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