请问粪便和肠内容物用甘油保存之后怎么活化呢？

不同目的下的“活化”方法差异显著。以下按几类常见应用简要说明：

 

一、用于微生物培养的“活化”

若甘油冻存的样品用于后续分离培养，尤其是厌氧菌或肠道共生菌：

推荐步骤：

1、快速解冻

• 取冻存样本置于37°C水浴中快速解冻，避免反复冻融造成菌群死亡。

• 解冻后立即转入无菌条件下操作。

 

2、去除甘油

• 可用无菌PBS缓慢稀释后离心（如8000 rpm，5 min），弃上清。

• 重复1次，减少甘油对后续培养系统的抑制作用。

 

3、预培养或直接接种

• 根据目标菌群种类选择对应培养基（如GAM、BHI、mGAM等）及培养条件（需氧/厌氧）。

• 可先进行预富集（如液体培养12~24 h）后再铺板分离。

注：甘油本身具有一定抑菌性，因此必须彻底去除，且所有步骤建议在无菌、低氧/厌氧条件下进行。

 

二、用于分子生物学研究（如宏基因组/16S）

若甘油冻存样品用于DNA提取后测序，无需“活化”，但需注意：

• 解冻后直接进行DNA提取即可；

• 推荐使用物理+化学联合裂解（如Bead-beating配合CTAB/SDS等）增强细菌裂解效率；

• 甘油对DNA提取影响较小，但高比例甘油样品可先稀释或洗涤一次以减少抑制成分。

 

三、用于菌群移植或动物模型灌胃

此时需恢复菌群活性，同时保留其群体结构：

1、快速解冻；

2、避免离心洗涤（会丢失部分菌种）；

3、可直接加入预先温热的无菌PBS混匀，保持适度浓度后灌胃；

4、若考虑提高活性，可在灌胃前37°C厌氧预温30 min。

 

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