SUMO相关实验通常如何设计？若采用Western Blot，应选择哪类抗体？实验体系可以自行构建吗？

针对SUMO（Small Ubiquitin-like Modifier）修饰的研究，实验设计需根据具体研究目的（如：是否关注全局SUMO化、特定位点修饰、或特定底物蛋白）做精确区分。以下分层说明：

 

一、常见SUMO相关实验设计策略

1、总SUMO化水平检测

• 目的：观察细胞/组织中SUMO化动态变化，如应激、药物处理等条件下。

• 方法：Western blot 检测整体SUMO化蛋白谱；常用SUMO1、SUMO2/3抗体检测Smear（拖尾）信号。

 

2、特定位点/特定底物蛋白的SUMO化检测

• 目的：验证某一蛋白是否被SUMO化，或识别具体修饰位点。

• 方法：Co-IP + WB 或 Ni-NTA拉下 + WB 检测SUMO化形式，配合突变体（如K→R）验证修饰位点。

 

3、SUMO E1/E2/E3酶系统干预实验

• 目的：研究SUMO化调控机制。

• 方法：基因敲除/过表达SAE1/2、UBC9、PIAS家族等SUMO酶类，观察底物修饰变化。

 

4、细胞定位与功能实验

• 目的：观察SUMO化对蛋白功能的影响。

• 方法：GFP融合蛋白+突变体（WT vs SUMO-deficient），配合共聚焦显微镜、转录活性检测等手段。

 

二、Western Blot抗体选择

1、抗-SUMO抗体（用于检测整体SUMO化）

（1）Anti-SUMO1：用于检测特异性SUMO1修饰（常参与核内调控）。

（2）Anti-SUMO2/3（共交叉反应）：识别SUMO2与SUMO3修饰（通常在应激反应中快速上调）。

建议选择经验证具备Smear检测能力的抗体，如Cell Signaling、Abcam、Enzo等品牌的WB-validated抗体。

 

2、抗目标蛋白抗体

若研究特定底物蛋白的SUMO化，需搭配该蛋白的特异性抗体，在IP或WB中使用。

 

3、标签抗体（His、Flag、HA）

在使用标签蛋白（如His-SUMO）进行纯化或共表达时常用。

 

三、实验体系构建建议

1、可自行构建稳定或瞬时表达体系

• 表达His-SUMO1/SUMO2/3融合蛋白，有利于Ni-NTA拉下富集SUMO化蛋白；

• 搭配目标蛋白Flag-tag表达，进行SUMO化验证；

• 推荐在SUMO酶完整表达的细胞中进行实验，如HEK293T。

 

2、表达构建注意事项

• SUMO融合蛋白需具备活性结构（建议保留Gly-Gly末端）；

• 构建K-R突变体作为阴性对照，验证特异性；

• 表达量需适中，避免非生理性过表达导致伪影。

 

3、E3酶可联合共转染增强特异性SUMO化

如PIAS1、PIASy共表达增强某些靶蛋白SUMO化。

 

百泰派克生物科技--生物制品表征，多组学生物质谱检测优质服务商

 

相关服务：

蛋白质SUMO化鉴定