蛋白复煮温度时间是多久呢？稀释之后还能煮吗？

蛋白样品复煮（即加热变性）通常用于SDS-PAGE上样前破坏蛋白的高级结构，确保电泳迁移主要反映分子量。具体复煮温度与时间如下：

 

一、常规复煮条件

• 温度：95°C 或 100°C（沸水）

• 时间：5 分钟

若样品粘稠或高浓度、含有膜蛋白等复杂组分，可适当延长至 10 分钟，但避免过度煮沸导致蛋白降解。

 

二、是否可在稀释后再煮

可以，但需注意以下几点：

1、确保Buffer体系完整

稀释后样品中仍需含有 还原剂（如DTT或β-巯基乙醇）和 SDS，以确保充分变性与还原。否则煮的意义不大。

 

2、稀释倍数不宜过大

稀释太多可能导致蛋白浓度过低，影响条带清晰度；一般建议稀释后仍维持 >0.5 μg/μL。

 

3、煮后不建议长期放置

复煮完成的样品推荐尽快上样，尤其含SDS和还原剂的体系易降解或形成沉淀。

 

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