请问没有变性的蛋白会更容易降解吗?提取的蛋白放-80°C能保存多久呀?
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天然构象的蛋白保留了完整的空间结构,通常也保持活性。如果溶液中存在残留蛋白酶或微量金属离子,这类蛋白因易被识别、切割而降解速度较快。
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变性处理(如加 SDS、尿素、加热)会失去结构和活性,多数蛋白酶难以切割,但变性状态通常不适合功能检测或结构研究。
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因此,未变性蛋白更需严格抑制蛋白酶活性(加入protease inhibitor cocktail),并保持低温。
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在含甘油(常用10–50%)或少量缓冲盐的条件下,蛋白可在-80 °C稳定保存数月至1年,具体取决于蛋白本身稳定性(结构复杂性、二硫键、是否膜蛋白等)。
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无保护剂、仅以PBS或水溶液保存,冻融循环会严重影响结构,通常几周至1–2个月活性就明显下降。
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避免频繁冻融:建议分装小体积一次性使用。
需要区分两方面:蛋白质自身结构状态与保存条件对稳定性的影响。
一、未变性蛋白的降解风险
二、-80 °C保存期限
建议
明确蛋白种类、后续用途(活性检测、结构研究还是质谱分析),选择合适的缓冲体系和保护剂,并在制备时加入广谱蛋白酶抑制剂,以显著延长保存期。
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