植物蛋白质组学样品制备，最后用什么溶解呢？

植物蛋白质组学样品的最终溶解液需根据下游分析平台（质谱型 LC-MS/MS 或 2D-PAGE）及处理步骤决定，一般遵循以下原则：

 

一、质谱分析（LC-MS/MS）常用溶液

1、目标是兼顾蛋白完全溶解、可酶解（胰蛋白酶）、且对质谱兼容。

2、常用缓冲液：

• 50 mM NH₄HCO₃（碳酸氢铵）或 50 mM HEPES，pH 7.8；

• 蛋白变性需时可加入少量尿素（≤6 M），但酶解前需稀释至 ≤1 M。

3、禁止使用 SDS、Tris 高盐等影响质谱的组分。

 

二、2D-PAGE 或电泳前

1、常用 7–8 M 尿素 + 2 M 硫脲 + 4% CHAPS + 1% DTT 的裂解液；

2、上样前需进一步与等电聚焦缓冲（含 IPG buffer）混合。

 

三、一般建议

1、上样前过滤或低速离心，去除颗粒；

2、尽量使用 LC-MS 兼容的挥发性缓冲（如 NH₄HCO₃）；

3、根据样品量控制浓度（常见 0.5–2 µg/µL）。

 

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