如果我提取完蛋白，在室温放了差不多六个小时，还能用吗？

蛋白提取后在室温放置六小时，不推荐继续使用。

 

1、蛋白稳定性

（1）如果提取的是总蛋白且主要用于SDS-PAGE、Western blot等耐变性分析，影响可能相对较小，尤其在样品中已有PMSF等蛋白酶抑制剂，且没有明显变色或沉淀。但室温六小时仍属高风险，结果需谨慎解读。

（2）若样品用于酶活性测定、pull-down、质谱等对蛋白天然构象敏感的实验，室温放置六小时会有显著降解风险，建议弃用或重新提取。

 

2、缓冲液成分

（1）若提取缓冲液中含有蛋白酶抑制剂（如PMSF、cocktail），可在一定程度上减缓降解；

（2）是否含有保护剂（如甘油、DTT、EDTA）也会影响稳定性；

（3）若是裂解液为RIPA、NP-40等含去污剂系统，在常温下更容易发生蛋白变性或降解。

 

3、预期用途

 

应用方向	建议
SDS-PAGE/Western blot	可试用，注意条带完整性
酶活性分析	不建议使用
Co-IP / pull-down	不建议使用
蛋白质谱（LC-MS/MS）	不建议使用，易降解干扰定量

 

建议操作：

1、如仍需使用，先上胶预实验，观察是否有降解条带；

2、后续操作中务必保持低温（全程4℃或冰上）；

3、建议今后提取后立即分装并-80℃保存，避免重复冻融。

 

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