转录组学样品提取的步骤是什么呢？

转录组学样品提取的核心在于高质量总RNA的提取与质量控制，整个流程必须避免RNA降解，并尽可能保留原始转录本表达信息。以下是标准化的步骤：

 

一、样品准备

• 样本类型：可为细胞、组织、新鲜或冻存样本，推荐立即使用液氮速冻并保存于−80°C或RNA保护液中。

• 注意事项：全程避免RNase污染，使用DEPC处理的器具和试剂。

 

二、RNA提取

常见方法有：

• TRIzol法（酚/氯仿法）：适合多数组织样品，提取效率高；

• 柱式试剂盒（如Qiagen RNeasy）：操作简便，适合高通量样本处理，纯度更佳但产量略低。

步骤概略如下：

1、细胞/组织裂解：加入TRIzol或裂解液，充分匀浆。

2、相分离：加入氯仿，离心分层，取水相。

3、RNA沉淀：加入异丙醇，离心回收RNA。

4、清洗与重悬：70–75%乙醇洗涤后，RNA用无核酸酶水重悬。

5、（可选）去除gDNA污染：DNase I处理（建议必须）。

 

三、RNA质量控制

1、浓度测定：NanoDrop或Qubit，要求 A260/280 ≈ 2.0，A260/230 ≥ 1.8。

2、完整性评估：使用Agilent Bioanalyzer 或 TapeStation 测定 RIN 值（RNA Integrity Number）：

• RIN ≥ 7.0：适合转录组建库；

• 若仅用于3'端测序，RIN ≥ 5也可接受；

• 若样本降解严重，可考虑使用rRNA去除方案而非polyA富集。

 

四、储存

• 短期（<1周）：−80°C；

• 长期：建议加入RNA稳定液（如Ambion RNAstable）或冻干保存。

 

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