非变性蛋白，未煮，未变性，加loading后可以直接冻存吗？可以加一点ME吗？

是的，未变性蛋白样品在加loading buffer（上样缓冲液）后是可以直接冻存的，但需要注意以下几点：

可以直接冻存的条件：

（1）上样缓冲液（Loading Buffer）不含SDS或变性剂

• 如果你使用的是非还原性、非变性条件的上样缓冲液（如没有SDS、没有DTT/β-ME、没有加热），那么冻存是完全可以的。
• 常见用于native PAGE的上样缓冲液通常不会含SDS或强还原剂。

 

（2）冻存条件适当

• 一般建议：-80°C 冻存，避免反复冻融。
• 分装成小量保存，减少冻融次数对蛋白活性的影响。

 

关于是否可以加一点β-ME（巯基乙醇）

可以，但取决于用途：

（1）β-ME是还原剂，会破坏二硫键结构，对某些蛋白是必要的，对某些则会影响活性或结构。

（2）如果你后续需要进行还原性SDS-PAGE或者想防止蛋白氧化，那么可以加入少量β-ME（常规浓度 1–5% v/v）。

（3）如果是要用于native PAGE或者保留天然构象的实验，不建议加β-ME。

 

推荐做法：

实验目的	加β-ME	冻存方式
Native PAGE / 保留天然结构	不加	分装 -80°C
SDS-PAGE / 变性电泳	可加	加后直接冻存
活性检测 / 酶活分析	不加或慎加	尽量新鲜使用或快速冻存

 

 

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