靶向脂质组学细胞样本只做单一质谱分析，萃取剂和细胞的关系。细胞样本加多少萃取剂？

在靶向脂质组学分析中，细胞样本的萃取剂用量取决于多个因素，包括：

1、细胞数量（细胞总量或蛋白总量）

2、所用的萃取剂体系（如 Bligh & Dyer、Folch、MTBE 等方法）

3、质谱的灵敏度与样品需求

4、是否添加内标标准品

 

常见萃取剂体积与细胞数量关系

1、以细胞数为基础

（1）通常推荐 每 1 × 10⁶ 个细胞 加入 1 mL 总萃取体系（包括有机溶剂+水/缓冲液）。

（2）若使用MTBE法，一般按照如下体积添加萃取剂：

• 80 μL 甲醇
• 400 μL MTBE
• 振荡后加入 200 μL 水进行相分离

 

2、以蛋白量为参考（常用于标准化）

每 100 μg 总蛋白建议使用约 200~500 μL 的萃取体系。

 

实验推荐流程（以MTBE法为例）

步骤概览（适用于贴壁或悬浮细胞）

1、细胞处理

（1）收集细胞（如：1~5 × 10⁶ 个细胞）

（2）用冷 PBS 洗涤 1-2 次

（3）可选：记录细胞数或做蛋白定量，用于后续标准化

 

2、加入萃取剂

（1）加入 80 μL 冷甲醇

（2）加入 400 μL 冷 MTBE

（3）涡旋或超声混匀 30 秒

（4）室温孵育 1 小时（或 4℃摇床）

 

3、相分离

（1）加入 200 μL 去离子水

（2）混匀后离心（3,000 rpm，15 min，4℃）

（3）上层为脂质层（MTBE），小心转移用于质谱分析

 

注意事项

1、比例原则：萃取剂总体积通常应为样本体积的 5~10 倍以上，确保充分提取。

2、内标：建议在萃取剂中添加已知浓度的脂质类内标（如 SPLASH Lipidomix），提高定量准确性。

3、温度控制：整个操作过程最好在冰上或4℃条件下进行，减少脂质氧化或降解。

 

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