请问wb提取后的蛋白放在负八十后，重新加loading的话还需要再次测量蛋白浓度吗？

一、蛋白溶液冻存前的处理情况

1、是否已加样缓冲液（loading buffer）并煮样

若已加SDS-PAGE上样缓冲液并变性（如95°C煮样5 min）：

（1）此类样品为终末处理，可直接取用上样；

（2）无需再次测浓度，但注意冻融次数不宜超过1–2次以避免蛋白降解或聚集影响条带清晰度。

 

2、若冻存前为纯蛋白裂解液，尚未加上样缓冲液

建议重新测量蛋白浓度（如使用BCA或Bradford），因为：

（1）冻融可能引起部分蛋白沉淀、浓度变化；

（2）特别是裂解液中含SDS或其他抑制剂时，沉淀更常见；

（3）可在缓慢融解（冰上）后充分混匀再取样测浓度。

 

二、实验建议

1、若蛋白总量本身有限或对定量要求严格（如做条带强度比较），强烈建议复测浓度以确保上样一致性；

2、复测前务必彻底解冻并充分混匀，避免取样误差；

3、若样品体积允许，也可对照上次浓度进行上样，但需承担冻融可能导致的不确定性。

 

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