如果想测定蛋白NC端，样品的条件是怎样的？

一、测定蛋白N端样品类型要求

1、纯度要求

建议蛋白纯度 >90%（SDS-PAGE 单一条带），避免其他蛋白N端信号干扰。

 

2、蛋白量

一般需要≥10 µg纯蛋白，若进行富集/化学衍生则建议≥50 µg。

 

3、缓冲液成分限制

（1）避免含有高浓度Tris（干扰N端化学衍生）或胺类缓冲液；

（2）避免SDS、NP-40、Triton X-100等强去污剂；

（3）高盐（>200 mM NaCl）和甘油 (>10%) 也应避免；

（4）最佳为20 mM HEPES 或 PBS，pH 7.4，低盐（<100 mM NaCl）。

 

4、其他处理信息

（1）如样品经还原烷基化、酶切、标签融合（His-tag等），需明确说明尤其是N端是否天然暴露；

（2）表达系统信息（如E. coli、哺乳动物、真核）也需提供，因其影响N端修饰（如N端甲酰化、乙酰化、剪切）。

 

二、测定蛋白C端样品准备要求

1、纯度与样本量

建议蛋白纯度 >90%，量≥50 µg，C端信号相对弱需更高输入量以增强检测成功率。

 

2、缓冲液要求

（1）避免胺类缓冲液（如Tris）、强去污剂（SDS）、高盐或甘油；

（2）推荐使用20 mM HEPES, pH 7.4，低盐条件（<100 mM NaCl）。

 

3、蛋白状态与修饰信息

（1）明确是否为天然终止C端，是否带标签（如His-tag、FLAG等）以及表达系统（E. coli 表达常伴随非天然C端）；

（2）C端常见修饰如酰胺化、羧基甲基化等会影响质谱识别，建议预先评估可能性。

 

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