我有肽段MALDI谱图,请问怎样可以判断属于什么蛋白?
若您已有肽段的MALDI-TOF质谱图,判断其来源蛋白的基本思路是通过肽质量指纹图谱(Peptide Mass Fingerprinting, PMF)进行数据库检索。
一、判断蛋白的基本步骤
1、从MALDI谱图中提取肽段峰位(m/z值)与相对强度
重点保留高强度、分布均匀的峰,通常选取质量范围在800–4000 Da之间的肽段峰。
2、进行质量校准与质量误差控制(一般设±50 ppm 或 ±0.1–0.2 Da)
校准峰可用trypsin自裂峰或标准品肽段。
3、使用数据库检索工具(如Mascot)进行PMF分析
输入参数包括:
(1)实验物种(如human, mouse等);
(2)酶种(通常为Trypsin);
(3)固定/可变修饰(如Cys烷基化、Met氧化等);
(4)质量容差(Da或ppm);
(5)允许缺失切点(missed cleavages)。
4、分析匹配结果
(1)得分(Mascot Score)高且唯一性强者为候选蛋白;
(2)若匹配多个蛋白,应结合序列覆盖率、得分排名、功能注释等进行综合判断。
二、技术注意事项
1、酶切清晰度决定匹配准确度: 尽量确保蛋白酶切完全,杂峰少;
2、样本复杂性低时PMF更可靠,复杂混合物建议使用 LC-MS/MS;
3、若峰少或匹配不明晰,建议补做MS/MS鉴定肽段序列以提高特异性。
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