请问蛋白不煮放-80能保存多久?
蛋白样品在”未煮沸(即未加热变性)“状态下置于 -80°C 冻存,其可接受的保存时间取决于以下因素:
一、加入裂解液且含抑制剂(推荐方式)
1、若使用含 SDS、RIPA 等变性裂解液并加入蛋白酶/磷酸酶抑制剂:可稳定保存 1–3 个月,多数蛋白不会明显降解。
2、若含胰蛋白酶敏感蛋白或磷酸化蛋白,建议 1个月内使用。
3、可分装避免反复冻融(冻融 >2次易降解)。
二、加裂解液但无抑制剂
易发生蛋白酶缓慢活化导致降解,即使低温下仍可能影响敏感蛋白:建议1周内使用,不适合长期保存。
三、细胞未裂解直接冻存
整个细胞结构对蛋白有一定保护作用,但胞内酶仍可能有微弱活性:可保存 1–2个月,但建议使用前一次性裂解并补加抑制剂。
四、特别提示
1、不建议将蛋白煮沸后冻存:蛋白煮沸变性后极易聚集沉淀,尤其对大分子或膜蛋白不利,冻融后常无法还原上样。
2、冻存前应快速操作,尽量避免样品在4°C长时间暴露。
3、对于低丰度、修饰类蛋白(如磷酸化、泛素化),保存期应更短,建议尽早使用。
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