请问来不及跑wb，蛋白是加裂解液冻-80比较稳定，还是直接细胞冻-80，还是加buffer煮了再冻-80？

如无法立即进行WB实验，以下三种处理方式的蛋白稳定性排序及建议如下：

推荐顺序（从高到低）：

1、加裂解液煮沸后冻存（推荐）

（1）裂解液中含蛋白酶/磷酸酶抑制剂，可最大程度抑制降解与修饰改变；

（2）煮沸使蛋白完全变性，SDS和还原剂（如DTT）可稳定蛋白结构，显著降低降解风险；

（3）样品可较长时间稳定保存（一般可稳定数周至数月）。

 

2、细胞直接冻-80°C（次优）

（1）未裂解的细胞中蛋白质结构较为完整，但细胞内酶活性仍可能缓慢进行，尤其对磷酸化等修饰不利；

（2）再次解冻裂解时务必快速进行，并补加抑制剂。

 

3、加裂解液后立即-80°C冻存（不推荐）

长期保存未变性的裂解液样本，易导致蛋白降解。

 

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