请问可以通过质谱检测某种蛋白的糖链结构吗?
可以的,质谱(Mass Spectrometry, MS)可以检测蛋白质的糖链结构,而且这已经是当前糖蛋白研究中非常成熟和广泛使用的核心技术之一。
常见的应用流程(概略):
1、样品准备
(1)分离目标蛋白(可以是纯化蛋白,也可以从细胞裂解液中富集)。
(2)常用酶(如PNGase F)可释放N-糖链;O-糖则需要其他方法或化学处理。
2、糖链释放与纯化
(1)可释放游离糖链也可直接分析糖肽或糖蛋白。
(2)糖链可进一步标记(如PA、2-AB、Permethylation)增强质谱信号。
3、质谱分析
(1)使用 MALDI-TOF-MS、ESI-MS、LC-MS/MS 等。
(2)若分析的是游离糖链:MALDI 更常见。
(3)若分析的是糖肽(蛋白消化后带糖的肽段):LC-MS/MS 更合适,可定位糖基化位点。
4、数据解析
(1)使用软件(如 Byonic、GlycoWorkbench、pGlyco 等)进行峰赋值和结构推测。
(2)可以通过数据库匹配(如 GlyTouCan)或脱糖酶辅助验证结构。
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