WB蛋白没加loadingbuffer直接放进-80保存了，已经测过蛋白浓度，2周以内跑会有影响吗？

2周以内在-80°C冻存、未加loading buffer的蛋白样本，一般来说影响较小，大多数蛋白可以正常跑 WB，但可能会有轻微降解或信号减弱的风险，特别是对不稳定蛋白（如磷酸化蛋白）影响稍大。如果蛋白稳定性较好且冻存期间未反复冻融，基本不影响使用。

 

实验建议：

如果你决定继续使用这批蛋白样本：

1、解冻后立即补加Loading Buffer（推荐4×或5×，补足到1×浓度）；

2、立即变性煮样：95°C，5–10分钟；

3、尽量一次性用完，避免再次冻存；

4、若担心信号差，可以多加一点蛋白上样量试试（比如20–30 µg，看你原本的量是多少）；

5、跑一块小胶先看看条带情况，作为预实验。

 

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