WB蛋白不加Loading，也没有加蛋白酶抑制剂，直接放-80是不是就降解了呀？
是的，这种情况下蛋白很可能已经部分降解了，具体分析如下：
一、没有加 Loading Buffer（上样缓冲液）
Loading buffer（通常含 SDS、甘油、DTT/BME、溴酚蓝等）有以下作用：
1、变性蛋白、保持线性结构
2、抑制蛋白酶活性（部分靠高浓度 SDS 和还原剂）
3、减缓降解过程
不加 Loading buffer，蛋白酶可能在冰冻前仍然活跃，尤其是在样品离心、裂解之后，蛋白酶暴露的情况下。
二、没有加蛋白酶抑制剂
细胞裂解后内源性蛋白酶会快速激活，若无蛋白酶抑制剂，蛋白在短时间内就可能降解。
三、直接放 -80°C 冷冻
虽然 -80°C 可以抑制大多数酶活性，但冷冻速度不是瞬间的，在冻结过程中（尤其是从室温或冰上到 -80°C 的这段时间）蛋白酶仍有活性，会发生一定程度的降解。
四、可能后果
1、蛋白总量减少，尤其是易降解的目标蛋白
2、WB上目标条带变弱甚至消失
3、出现非特异降解条带或 smear（拖尾）
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