请问同时在一块胶上跑还原SDS-PAGE和非还原SDS-PAGE有影响吗?

不推荐同时在同一块胶上跑还原（reducing）SDS-PAGE和非还原（non-reducing）SDS-PAGE，主要原因如下：

 

一、还原剂扩散影响非还原泳道

1、还原SDS-PAGE通常加入 DTT（Dithiothreitol）或 β-ME（β-mercaptoethanol）用于破坏二硫键，使蛋白完全变性。

2、但还原剂可能会在电泳过程中扩散到非还原泳道，部分影响非还原蛋白，使其部分还原，导致条带异常。

 

二、蛋白迁移速率不同

1、还原条件下，蛋白完全变性后会以分子量大小迁移。

2、非还原条件下，蛋白可能仍维持二硫键形成的高级结构，迁移模式不同。

3、这种混合泳动可能导致蛋白条带难以准确比较。

 

三、胶内电泳环境不一致

1、还原剂可能影响缓冲液 pH 值，使同一块胶内不同泳道的泳动情况不均。

2、还原剂可能影响蛋白的染色效果，导致条带可比性下降。

 

四、最佳做法

1、分开跑两块胶，分别进行还原和非还原 SDS-PAGE以获得准确的蛋白条带信息。

2、若必须在同一块胶上跑，建议：

• 让还原样品远离非还原样品（但扩散仍可能影响）。
• 减少还原剂用量，但可能影响蛋白完全变性。
• 尽快完成电泳，减少还原剂扩散的时间。

 

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