做wb实验蛋白提取了没有离心怎样保存啊?
在 Western Blot (WB) 实验中,如果蛋白提取后未进行离心,但需要暂时保存,建议按照以下方式操作:
一、短期保存(数小时至1天内)
1、温度:可将样品置于冰上(0-4℃),避免蛋白降解。
2、注意事项
(1)由于未离心,样品中可能存在细胞碎片、核酸等杂质,在使用前务必离心去除沉淀(建议 12,000 × g, 4℃, 10-15 min)。
(2)若冰存时间较长,蛋白酶活性可能导致蛋白降解,建议加入 蛋白酶抑制剂(Protease Inhibitor Cocktail)。
二、中期保存(1-3天)
1、温度:4℃冷藏,防止蛋白降解。
2、操作:
(1)需保证样品瓶密封良好,防止污染和蛋白降解。
(2)加入蛋白酶和磷酸酶抑制剂,提高蛋白稳定性。
三、长期保存(1周以上,不建议长期保存)
1、温度
(1)-20℃(适用于短期保存,可能导致蛋白降解,建议尽早使用)。
(2)-80℃(适用于长期保存)。
2、操作
(1)若含有裂解液,低温保存前建议先离心(12,000 × g, 4℃, 10-15 min)去除细胞碎片,否则冻融后可能影响蛋白浓度测定和实验结果。
(2)加入甘油(Glycerol,最终浓度10-20%) 可减少冰晶形成,防止蛋白变性。
(3)避免多次冻融,建议分装保存,每次使用一份。
四、特殊情况
1、若蛋白提取液含有高盐或变性剂(如尿素、SDS),在冻存时应注意其对蛋白活性的影响,特别是一些对高盐敏感的蛋白。
2、对于某些活性依赖结构的蛋白(如酶类),尽量避免反复冻融,可用蛋白稳定剂(如BSA、甘油等)。
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