请问非还原SDS-PAGE上样前需要煮样吗？25kDa蛋白看分子内二硫键的话，非还原条带的电泳条件是多少?

在非还原性SDS-PAGE（Non-reducing SDS-PAGE）实验中是否需要煮样取决于你的实验目的和蛋白的特性。

 

一、非还原SDS-PAGE上样前是否煮样？

1、可煮可不煮，但不加 DTT/β-ME。

2、50°C 5 min 轻微加热可帮助变性，不煮样可保持蛋白更接近天然构象。

 

二、25 kDa 蛋白检测分子内二硫键的电泳条件

1、样品缓冲液（不加还原剂）：SDS 2%，Tris-HCl（pH 6.8）62.5 mM，甘油 10%，溴酚蓝 0.01%。

2、凝胶：分离胶 12-15%，浓缩胶 4-5%。

3、电泳缓冲液（不含 DTT/β-ME）：Tris 25 mM，甘氨酸 192 mM，SDS 0.1%。

4、电泳条件：

（1）恒压 80V（浓缩胶）→ 120V（分离胶）。

（2）或恒流 20-30 mA。

 

三、预期结果

1、有分子内二硫键：非还原条件下迁移率更高（泳动更快）。

2、无二硫键影响：条带位置无明显差异。

建议同时跑 还原和非还原 SDS-PAGE 进行对比。

 

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