蛋白质加了loadingbuffer煮样跑page会因为高温变性导致蛋白降解吗？
在SDS-PAGE实验中，蛋白加了Loading Buffer并经过高温变性，主要目的是使蛋白质完全变性、解聚和去除二硫键，从而获得均一的电泳迁移行为。但在这个过程中，大多数蛋白不会降解，因为SDS、DTT（或β-巯基乙醇）等变性剂只会破坏蛋白的二级、三级结构，使其线性化，而不会直接降解主链（肽键）。
某些蛋白质可能会降解，主要是以下几个因素导致：
（1）蛋白本身不稳定：某些蛋白对高温特别敏感，如富含谷氨酰胺（Q）或天冬酰胺（N）的蛋白，可能发生高温水解或脱氨基作用。
（2）存在蛋白酶残留：如果样品中有蛋白酶未被彻底抑制，蛋白在加热过程中可能仍然被降解（如不加蛋白酶抑制剂）。
（3）样品浓度过低：低浓度蛋白在高温下更容易水解或氧化，特别是在没有足够SDS和DTT保护的情况下。
如何避免蛋白降解
（1）合理控制温度和时间：一般推荐 95℃，5-10 min。
（2）添加蛋白酶抑制剂：在裂解和样品准备过程中添加蛋白酶抑制剂（如PMSF、蛋白酶抑制剂cocktail），减少降解风险。
（3）检查SDS和还原剂：确保SDS和DTT（或β-巯基乙醇）浓度充足以保证完全变性，防止蛋白聚集。
（4）避免反复冻融：蛋白样品如果反复冻融也可能导致降解，建议储存于-80℃并尽量减少冻融次数。
（5）使用新鲜的样品缓冲液，确保pH合适（6.8-8.0），避免因pH失调导致的蛋白化学降解。
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