WB蛋白不加Loading直接放-80能保存多久呢？

在 Western Blot (WB) 实验中，蛋白样品在不添加Loading buffer的情况下直接放入-80℃保存，其稳定性会受到以下因素的影响：

 

一、蛋白质的性质

1、不同蛋白质的稳定性各异，某些蛋白质对反复冻融、pH变化等较为敏感，例如：

（1）酶类蛋白：活性可能下降。

（2）小分子或高疏水性蛋白质：可能容易变性或聚集。

 

2、总体来说，大部分蛋白质在适当条件下（-80℃低温，无频繁冻融）能保持结构和功能较长时间。

 

二、保存时间的预估

1、短期保存（1-2周）： 蛋白质通常稳定，尤其在新鲜提取后立即保存的情况下。

2、中期保存（1-2个月）： 如果样品未受污染，大部分蛋白质仍可保持稳定。

3、长期保存（>3个月）： 蛋白质可能会逐渐降解、失活或聚集，特别是在不添加稳定剂（如Loading buffer或其他保护剂）的情况下，蛋白质稳定性会显著降低。

 

三、没有Loading buffer的风险

1、Loading buffer（例如SDS-PAGE的上样缓冲液）通常包含以下成分，有助于保护蛋白：

（1）SDS或其他去污剂： 防止蛋白聚集。

（2）还原剂（如DTT或β-巯基乙醇）： 防止二硫键重新形成。

（3）甘油： 提供一定的保护作用，防止蛋白质因冻融而失活。

（4）pH缓冲剂： 稳定蛋白质环境。

 

2、不加这些保护剂，蛋白质更容易发生以下变化：

（1）冻融过程中形成不可逆聚集体。

（2）部分蛋白质降解或失活。

 

四、建议的操作

如果必须保存不加Loading buffer的蛋白样品，以下方法可提高稳定性：

1、立即分装： 避免反复冻融造成蛋白质变性。

2、保持低温稳定性： 使用-80℃保存，避免温度波动。

3、添加蛋白酶抑制剂： 尤其对于裂解液中的蛋白质，避免蛋白酶活性对蛋白的降解。

 

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