在高效液相测分子量实验中，难溶性多糖例如琼脂，难以溶解到水或者盐流动相中，因此无法过膜，这怎么解决呢？
在高效液相色谱（HPLC）中，如果需要测定难溶性多糖（例如琼脂）的分子量，但这些多糖难以溶解在水或常规盐流动相中，确实会遇到溶解性和过膜的问题。解决这个问题的方法可以考虑以下几种策略：
一、选择适当的溶剂系统
1、使用温度升高：琼脂等难溶性多糖在高温下溶解性较好，可以通过将样品溶解在温热的溶剂中（例如加热水或缓冲溶液）来提高其溶解性。实验中通常会选择在约60°C或更高的温度下进行溶解，但需要确保溶剂不会损坏样品或改变其分子结构。
2、使用强溶剂或混合溶剂：有时可以使用含有适当浓度盐、尿素、甘油、二甲基亚硫酰胺（DMSO）等有机溶剂的混合溶液，帮助琼脂等多糖溶解。注意选择对样品不会造成化学降解或分子结构改变的溶剂。
二、采用更合适的流动相
1、对于高分子量和难溶性多糖样品，可以考虑使用专门的溶剂系统，例如含有溶解剂或高浓度盐的缓冲液，这样不仅有助于多糖的溶解还可以有效避免样品与HPLC柱的相互作用。
2、可以使用含有表面活性剂（如Tween、SDS）的流动相，有时这些助溶剂可以帮助提高多糖的溶解度，从而使样品顺利通过膜和柱。但表面活性剂可能会在HPLC柱上积累，导致柱效下降或基线噪音增加。为减少影响，可以在样品前处理后移除表面活性剂，或选择可逆性添加的方法。
三、优化样品前处理
1、酶解法：如果琼脂等多糖难以溶解，可以通过酶解的方式降低其分子量，使其更易溶解。对于某些多糖样品，采用水解或其他酶切方法，分解成较小的片段，有时能够使其在HPLC中更加适合检测。要注意避免过度降解导致多糖结构改变。
2、微波辅助溶解：利用微波加热可以快速提高溶剂温度，帮助溶解较难溶解的样品。微波加热能够提高溶剂的溶解能力，使多糖更容易溶解。
四、膜过滤技术
1、使用较大孔径的过滤膜：对于大分子量的多糖，如果标准的过滤膜孔径（如0.45μm）过小，可以选择较大孔径的过滤膜（如0.8μm或1μm），帮助多糖样品顺利通过过滤环节。
2、使用超滤膜：超滤膜可以帮助去除样品中的颗粒杂质，同时保留较大分子量的多糖，确保样品的纯度。
五、使用凝胶渗透色谱（GPC）/大小排阻色谱（SEC）
对于分子量测定，凝胶渗透色谱（GPC）是一种常用的技术，特别适用于聚合物和大分子物质的分子量分析。如果琼脂样品能在某些溶剂中溶解，GPC技术结合适当的溶剂系统可以非常精确地分析其分子量。
通过这些方法，可以有效克服琼脂和其他难溶性多糖的溶解和过膜问题，从而实现高效液相色谱分析其分子量。
百泰派克生物科技--生物制品表征，多组学生物质谱检测优质服务商
相关服务：
How to order?
