Pull-down silver stain
银染(silver stain)是对聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质进行染色的过程,在碱性条件下,甲醛可以将蛋白带上的硝酸银(银离子)还原成金属银,使银颗粒沉积在蛋白带上而染色。染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关,不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。
Pull-down银染(Pull-down silver stain)是将Pull-down样品进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰氨凝胶(SDS-PAGE)电泳分离后进行银染的过程。Pull-down产物进行SDS-PAGE凝胶电泳后可选择银染,银染相较于考马斯亮蓝染色具有产物比较少和灵敏度较高等优势。银染试剂里不能使用戊二醛,因为它会对蛋白进行修饰从而影响后续的蛋白鉴定。
质谱检测银染蛋白胶条的切胶要求:若检测单一蛋白条带,则只切取该蛋白条带位置即可;若检测多个蛋白条带,则分别切取后合并;若检测整个泳道蛋白,建议样品只跑较短时间浓缩胶或分离胶即可切取检测,染色无需颜色过深(脱色反而费时),也可直接固定无需染色。
对银染胶条进行鉴定是一种定性分析,并不是一种定量分析。通常情况下分析银染样本的成功率在90%左右,因为某些银染过程会导致蛋白与聚丙烯酰胺凝胶基质发生交联,从而无法将蛋白从凝胶中提取出来。当银染样品中的蛋白含量低于蛋白鉴定所要求的最低量时(大于1ng)则不能用于质谱分析。
百泰派克生物科技利用进口的GST pull-down试剂盒结合先进的UPLC-MS质谱平台,提供快速准确的Pull-down靶蛋白质谱鉴定一站式技术服务,可对银染和考染等Pull-down拉下蛋白样品进行精确质谱鉴定。您只需将您的需求告诉我们并寄送样品,我们会负责项目后续所有事宜,包括样品前处理、Pull down、质谱分析、质谱原始数据分析。
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