HILIC-UHPLC分析N-聚糖键

糖苷键很少对糖蛋白的功能产生影响,因此通常不需要确定。然而,糖蛋白的聚糖结构高度复杂,评估N-糖的糖苷键的构型和位置对分析糖蛋白的结构是有帮助的。已知有五种常见的N-聚糖键,最常见的是N-乙酰氨基葡糖与天冬酰胺(GlcNAcβ1-Asn)连接。与Asn连接的其他类型包括:哺乳动物和古生菌的层粘连蛋白中的葡萄糖,古生菌中的N-乙酰半乳糖胺(GalNAc),鼠李糖素细菌。也有报告显示,葡萄糖在甜玉米中与精氨酸连接。

HILIC-UHPLC分析N-聚糖键

HILIC-UHPLC分析N-聚糖键

N-聚糖通过N-糖苷酶F(Peptide N Glycosidase F,PNGase F)反应从糖蛋白中水解出来。水解的N-聚糖用2-氨基苯甲酰胺(2-AB)标记,然后用多种外切糖苷酶消化。最后,通过亲水相互作用色谱法(HILIC)结合荧光和质谱检测对聚糖进行分析。

N-聚糖键分析一般步骤

1. 样品制备
2. N聚糖水解
3. 2-AB标记和标记的聚糖与一系列外切糖苷酶顺序反应
4. 基于UPLC-HILIC-FLD的分析
5. 此外,可以通过MS/MS片段确定详细的聚糖结构

内切糖苷酶的作用:
内切糖苷酶能从糖蛋白或糖脂中水解寡糖。通常它不会从结合的蛋白质和脂质分子中水解寡糖。内切糖苷酶通过破坏聚合物中两个糖单体之间的糖苷键起作用。
内切糖苷酶H:水解低聚甘露糖和杂合N-聚糖
内切糖苷酶F:水解简单的二价N-聚糖

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