内源性蛋白质的快速免疫沉淀质谱分析

内源性蛋白质的免疫沉淀 (IP) 是一种常用的技术，用于研究蛋白质-蛋白质相互作用或研究蛋白质的修饰。然而，传统的IP方法对于瞬态或弱相互作用的蛋白质来说可能会有些困难。因此，我们开发了一种快速IP方法，它可以更有效地收集弱相互作用的蛋白质。

 

一、方法

1. 预清洗

破碎细胞并收集上清液，将抗体添加到上清液中混合。

 

2. 免疫沉淀

使用抗体结合蛋白 G 球形珠将混合物在 4 °C 下旋转 2 小时。

 

3. 洗涤

洗涤珠子以去除非特异性结合的蛋白质。

 

4. 洗脱

使用洗脱缓冲液洗脱珠子上的免疫复合物。

 

5. 质谱分析

对洗脱的蛋白质样品进行质谱分析。

 

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