蛋白质靶向定量

    蛋白质靶向定量(Protein Target Quantification)旨在精确测量生物样本中特定蛋白质的丰度,它具有高通量、准确性和重现性的优势。利用差异蛋白质组学/转录组学/基因组学分析的早期数据,该方法验证了大生物样本量中的生物标志物。靶向定量选择性地收集和分析感兴趣的肽的定量质谱数据,在数百或数千个样品中实现更高的灵敏度和精度。在样品中添加稳定同位素标准品后,靶向定量可以对感兴趣的蛋白质进行绝对定量。它可应用于信号通路研究、肿瘤生物标志物研究、翻译后修饰分析,并可作为基于抗体的蛋白质定量方法之外的替代蛋白质靶向定量技术。

    靶向蛋白质组学

    图1. 靶向蛋白质组学


    靶向蛋白质定量技术有哪些?


    靶向定量蛋白质组学主要包括MRM/SRM和PRM技术。MRM(多重反应监测),也称为SRM(选择反应监测),是一种依赖三重四极杆质谱的经典靶向蛋白质分析方法。另一方面,最新的 PRM(平行反应监测)技术基于下一代高分辨率 Orbitrap 质谱法。


    SRM 通常被称为靶向蛋白质组学的黄金标准,是PRM技术(一种衍生技术)的基础。PRM 依赖于高质量、准确/高分辨率的质谱仪器,从而产生比 SRM 更具选择性、灵敏性和可重复性的目标定量结果。此外,PRM在复杂背景下表现出增强的抗干扰能力。从实际实施来看,PRM比SRM具有程序更简单、成本更低的优势,具体如下:

    • 无需针对目标蛋白质预先设计前体/碎片离子对,从而节省了实验设计和操作时间。
    • 可以灵活选择是否包含合成标准肽,从而节省大量成本。

    在应用方面,PRM可以取代传统的Western blot技术。一方面,它将蛋白质验证从商业抗体中解放出来,可以应用于各种非模型生物。另一方面,它允许在大规模生物样本上进行高通量蛋白质验证,从而提高实验效率。

     
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