糖基化位点鉴定

蛋白质糖基化是一种广泛存在、结构复杂多变的蛋白质翻译后修饰，根据蛋白质被糖类修饰形式的不同可以把蛋白质糖基化分成N-糖基化、O-糖基化、C-糖基化和糖基磷脂酰肌醇锚定连接四类。大多数糖化蛋白不只含有一个糖基化位点，糖基化的位点影响着蛋白质的运输和功能，因此对它的鉴定至关重要。

• N位糖基化：聚糖与天冬酰胺侧链的酰胺氮连接而修饰蛋白质。

• O位糖基化：聚糖与丝氨酸或苏氨酸残基上的氧连接来修饰蛋白质。

• 糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚定连接：GPI锚定连接是指包含糖核心在内的GPI锚通过与蛋白C端部位结合把蛋白连接到细胞膜上。

• C位糖基化：一分子甘露糖基通过C-C键连接到色氨酸吲哚环2号位C上，以此形式修饰蛋白质。

图1 糖基化的不同种类

随着质谱技术的不断发展，质谱已成为蛋白质组研究中最主要的技术之一。同时它也是分析糖蛋白应用最广泛的技术，特别是在糖基化位点分析。其一般步骤是通过电泳、层析等方法先富集糖蛋白，然后进行质谱分析。由于在质谱中，糖蛋白骨架包括糖骨架和蛋白骨架都会有一定的断裂规律，所以根据质谱所得到的图谱我们可以进行糖基化位点，蛋白序列，糖结构等分析工作。根据样品处理方式的不同，质谱分析糖基化位点可分为两类：

• 标记法：先对糖基化位点进行特异性标记，使之与未修饰的蛋白质之间存在特定的分子质量差异，再利用质谱技术检测这种差异，进而确定糖基化的位点。

• 酶解法：先用糖苷酶或酰化酶处理样品，使糖基化修饰的糖类分子与蛋白质解离，再通过质谱技术准确检测糖基化位点。

图2 质谱检测糖基化的一般流程

百泰派克生物科技采用MALDI TOF MS高分辨质谱系统和UHPLC技术提供糖基化位点分析服务，该服务可用于鉴定血浆/血清、细胞、组织或生物体表达的全部糖基化修饰，所有与蛋白质连接的聚糖都将通过酶消化水解，通过亲水色谱法分离后，使用质谱系统进行定量分析。您只需将实验目的告知并将样品寄出，我们将负责项目后续所有事宜，包括蛋白提取、蛋白酶切、肽段分离、质谱分析、质谱原始数据分析、生物信息学分析，欢迎您的咨询。

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