IP质谱的过程
IP质谱(免疫共沉淀-质谱)的过程包括以下步骤:
图1. IP-MS的一般流程
1. 样品制备:裂解细胞或组织,得到蛋白质提取物。
2. 免疫共沉淀(IP):将蛋白质提取物与特异性抗体和Protein A/G琼脂糖珠孵育,形成抗原-抗体复合物。洗涤去除非特异性结合的蛋白质。
3. 蛋白质洗脱:从琼脂糖珠上洗脱免疫复合物,得到目标蛋白及其相互作用蛋白。
4. 蛋白质消化:用胰蛋白酶等酶切割蛋白质成肽段。
5. 质谱分析(MS):通过液相色谱(LC)分离肽段,然后通过质谱仪(MS)分析肽段的质量/电荷比,得到蛋白质的质谱图。
6. 数据分析:利用质谱数据进行蛋白质鉴定和定量,分析蛋白质间的相互作用。
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