酪蛋白酶解得到的多肽段,上液质分析前,用C18spe柱脱盐,回收不到肽段,什么原因?
1.样品处理:
在样品处理过程中,可能存在一些问题。例如,样品可能没有完全结合到C18柱,或者在洗脱过程中可能没有完全洗脱。这可能是由于样品的pH值、离子强度、有机溶剂比例等条件不适合C18柱的结合和洗脱。
2.C18柱的选择:
不同的C18柱有不同的特性,包括颗粒大小、孔径、表面化学性质等。这些特性会影响到肽段的结合和洗脱效率。可能你的C18柱不适合你的样品。
3.洗脱液的选择:
洗脱液的选择也很重要。一般来说,含有一定比例的有机溶剂(如乙腈或甲醇)的洗脱液可以提高肽段的洗脱效率。但是,如果有机溶剂的比例过高,可能会导致肽段的溶解性降低,从而影响到回收率。
4.肽段的性质:
肽段的性质,如大小、电荷、疏水性等,也会影响到其在C18柱上的结合和洗脱效率。可能你的肽段的性质不适合用C18柱进行处理。
5.操作问题:
在实验操作过程中,可能存在一些问题。例如,洗脱速度过快,可能会导致肽段没有完全洗脱;或者在洗脱过程中,可能存在一些机械性的损失,如样品的挥发、溅出等。
为了提高肽段的回收率,您可以尝试以下几个策略:
1.调整洗脱缓冲液的组成,例如增加有机溶剂的浓度。
2.使用新的、活性好的SPE柱。
3.根据您的肽段的特性调整样品的pH和盐浓度。
4.尝试使用其他类型的SPE柱,例如更加极性的SPE柱,以优化肽段的结合和洗脱。
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