考马斯亮蓝法测蛋白质含量原理
考马斯亮蓝染色法(Coomassie Brilliant Blue staining method)是一种常用于测定蛋白质浓度的方法。其原理基于考马斯亮蓝染料与蛋白质发生可逆结合的特性。当染料与蛋白质结合时,会导致染料的吸光特性发生改变,其最大吸收波长会从465 nm变到595 nm。
在酸性条件下,染料中的磷酸基团会被部分质子化,使染料带正电,而蛋白质上的氨基酸残基(特别是精氨酸和赖氨酸)会带负电。这导致染料与蛋白质之间产生电荷间的吸引力,使得它们结合。
通过在已知蛋白质浓度的标准样品中构建标准曲线,可以使用分光光度计在595 nm的波长下测量样品的吸光度,并通过比较标准曲线来估算样品中的蛋白质浓度。
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