常用的血清蛋白质含量测定方法有哪些
血清是血液中的一部分,去除了红细胞、白细胞、血小板和凝血因子后的液体部分。血清中包含大量的蛋白质,对于这些蛋白质的定量分析可以采用以下方法:
1.双硫酸盐法(BCA Protein Assay):
这是一种受到广泛使用的、基于铜离子与蛋白质结合后在双硫酸盐存在下产生紫色产物的方法。吸光度与蛋白质浓度呈线性关系。
2.Lowry方法:
这是一种老式的、经典的蛋白质测定方法,也是基于铜与蛋白质结合后在Folin-Ciocalteu试剂存在下产生的颜色变化。
3.Bradford蛋白质测定法:
该方法基于Coomassie蓝G-250与蛋白质之间的结合。这种结合导致染料从红棕色转变为蓝色,吸光度的增加与蛋白质浓度呈线性关系。
4.UV吸收法:
蛋白质可以在280nm处吸收紫外光,这主要是因为其中的芳香族氨基酸如酪氨酸和色氨酸。使用这种方法时,需要确保样品中没有其他吸收280nm光的物质。
5.免疫测定法:
例如ELISA或其他免疫学方法,可以用于血清中特定蛋白质(如肌酸激酶、转铁蛋白等)的测定。
6.电泳方法:
如血清蛋白电泳或SDS-PAGE,可以用于分析血清蛋白质的组成和相对丰度,但通常需要与其他定量方法结合使用。
7.质谱分析:
尽管这是一种更高级和复杂的技术,但它提供了对血清蛋白质深入分析的可能性,特别是在蛋白质组学的研究中。
选择哪种方法取决于实验的目的、所需的准确性、灵敏度、样品处理和分析的时间,以及实验室的设备和经验。对于大多数常规的血清蛋白质测定,BCA、Lowry和Bradford方法都是经济且有效的选择。
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