跪求真菌菌丝体全蛋白提取方法
一、 材料与试剂准备:
1.鲜菌丝体或冷冻菌丝体样本
2.蛋白提取缓冲液(通常包括:Tris-HCl、NaCl、EDTA、Triton X-100、PMSF等,具体成分可根据目标蛋白的特性进行调整)
3.液氮
4.清洁的研磨器或研磨珠
二、操作步骤:
1.收集鲜菌丝体,用清水清洗,去除多余的培养基和杂质,然后用滤纸吸去多余的水分。
2.如果是鲜菌丝体,可以将其冷冻至-80°C并存储,或者立即进行下一步。冷冻可以帮助破碎菌丝体。
3.在液氮中使用研磨器将菌丝体研磨成粉末。
4.将研磨好的菌丝体粉末转移到离心管中,加入适量的蛋白提取缓冲液。
5.于4°C下振荡混合约30分钟,充分释放蛋白。
6.于4°C下高速离心10-15分钟。
7.收集上清液,该液中包含提取的蛋白。
8.使用蛋白浓度测定方法(例如Bradford法)测定蛋白浓度。
三、注意事项:
1.蛋白提取过程中要尽量在低温环境下操作,以防蛋白降解。
2.根据需要,可以在蛋白提取缓冲液中添加蛋白酶和磷酸酶抑制剂。
百泰派克生物科技--生物制品表征,多组学生物质谱检测优质服务商
相关服务:
提交需求
How to order?