做western blot时,蛋白转到膜上了,但是marker看不到,为什么marker没转上呢?
这个问题涉及到的是Western Blot实验过程中的一个常见现象,当我们不能在膜上看到marker(蛋白分子量标记)的时候,可能的解释有很多。以下四点可能是主要的原因:
1.蛋白Marker的选择:
Marker的选择应该取决于目的蛋白的分子量。如果marker的分子量与目的蛋白过于接近,或者marker的分子量超出了目的蛋白的范围,那么在电泳和转膜过程中可能就会看不到marker。
2.Gel和blotting条件的选择:
实验中用于电泳和转膜的参数(如电压、时间、温度等)需要与所用marker和目的蛋白相对应。如果参数设置不当,也可能会导致marker检测不到。
3.显色剂:
实验中使用的显色剂可能会影响到marker的显示。比如显色剂选择不当、显色时间过长或是显色剂未完全覆盖整个样品可能都会导致marker的颜色淡化,甚至无法被看到。
4.Marker的损失或降解:
这可能是由于样品准备过程中的操作问题,如复溶不充分,存储条件不适当引起的marker降解,或者在转膜过程中丢失。
上述原因并不全面,还可能有其他因素。具体情况需要结合实验的细节来分析。对于此问题,专业的解决策略应包括详细检查实验步骤,优化实验条件,并考虑更换新的marker来进行确认。
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