请问蛋白质印记法实验怎么做？

蛋白质印迹（Western Blot）实验主要包括样品准备、SDS-PAGE电泳、转印、封闭、孵育特异性抗体、洗涤、发色或发光等步骤：




1. 样品准备:

• 从细胞或组织中提取蛋白质。
• 量化蛋白质，并将其与加载缓冲液混合。



2. SDS-PAGE电泳:

将样品加载到聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳，使蛋白质按照大小分离。




3. 转印:

将分离的蛋白质从凝胶转移到聚酯膜或硝酸纤维素膜上，通常使用湿式或半湿式转印。




4. 封闭:

使用一种不特异的蛋白质或其他封闭剂（如脱脂奶粉或BSA）处理膜，以阻止非特异性蛋白质-抗体结合。




5. 抗体孵育:

• 使用特异性的一抗孵育膜，通常在4°C下孵育过夜或室温下孵育1-2小时。
• 清洗膜，去除未结合的抗体。
• 接着使用与初级抗体结合的二级抗体孵育膜。二级抗体通常与一个可以检测的标签（例如酶或荧光分子）结合。



6. 发色或发光检测:

根据使用的二抗类型（例如，是否与酶或荧光染料标记），选择适当的检测方法。常见的方法包括化学发光和荧光检测。




7. 分析结果:

使用成像系统捕获膜上的图像，并使用适当的软件分析数据。




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