为什么 SDS-PAGE 电泳前要煮蛋白?
SDS-PAGE(Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis)电泳是一种常用的蛋白质分离技术。在进行SDS-PAGE电泳前煮蛋白的原因可以从以下几个方面来解释:
1. 蛋白质变性
通过加热和SDS的作用,蛋白质的三维结构被破坏,转变为线性结构。这样可以消除蛋白质之间的相互作用,使得蛋白质在电泳过程中的迁移不受其原始构象的影响。
2. SDS与蛋白质的结合
SDS是一种阴离子表面活性剂,能与蛋白质的多肽链结合,使蛋白质带有均一的负电荷。这样,蛋白质在电泳过程中的迁移速率主要取决于其分子大小,而不是原始的电荷。
3. 促进样品与缓冲液混合
加热有助于样品与缓冲液充分混合,确保SDS等试剂与蛋白质充分反应。
4. 减少样品的粘稠度
通过加热,可以降低样品的粘稠度,使其更容易被加载到凝胶孔中。
5. 杀灭可能的微生物污染
加热还可以杀灭样品中可能存在的微生物,减少实验过程中的污染风险。
SDS-PAGE电泳前的加热步骤是为了确保蛋白质完全变性和与SDS充分结合,从而实现对蛋白质按分子大小的有效分离。
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