蛋白电泳过后，条带蛋白如何分离纯化？

在SDS-PAGE电泳后，如果你希望从胶块中回收某一特定的蛋白条带，可以通过以下步骤进行纯化：




1.胶片染色和去色：

• 首先，将整个电泳胶用适当的染料（如考马斯亮蓝）进行染色。
• 经过一定时间后，用去色液去色，直至所需的蛋白条带清晰可见。



2.切割胶块：

使用干净、锋利的刀片或剪刀，沿着染色的蛋白条带切割胶片，尽量减少胶块周围不含蛋白的部分。




3.蛋白质萃取：

• 将切下的胶块放入一个微量离心管中。
• 添加适当的萃取液（如：50 mM Tris-HCl, pH 8.0, 含有0.1% SDS或其他适当的缓冲液）。
• 胶块在该溶液中摇匀或振荡一段时间，使蛋白从胶块中扩散到液体中。
• 通过离心，收集液体中的蛋白溶液，并弃去胶块。



4.蛋白质浓缩和进一步纯化：

• 使用蛋白浓缩管（如Amicon或其他品牌的超滤装置）可以浓缩蛋白溶液。
• 根据需要，可以使用其他纯化方法，如亲和层析、离子交换层析或凝胶渗透层析，进一步纯化或富集特定的蛋白。



5.蛋白质鉴定：

为了确认已经纯化的蛋白质的身份，可以使用质谱技术或其他生化分析方法进行鉴定。




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