IP后跑胶

在获得免疫沉淀（IP）样品之后，由于质谱检测的成本相对较高，需要在IP样品进行质谱检测之前进行IP后跑胶预实验。通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分别进行蛋白质印迹（Western blot，WB）及银染或考染预实验,评估该IP样品是否适用于质谱检测。通过SDS-PAGE电泳和银染或考染预实验可评估IP样品蛋白量，WB预实验可评估IP所用抗体的特异性和亲和富集效率。

通过加入SDS-PAGE试剂制作SDS-PAGE凝胶板，加入IP样品进行凝胶电泳跑胶，跑胶过程：先将电压设置为80 V，待样品进入分离胶后，调整电压为100-150 V。当溴酚蓝接近前沿时，停止电泳。若IP样品分子量较小，则注意前沿位置及时停止电泳。若IP样品分子量较大，可以延长电泳时间。全程大约需要1-2 h。

电泳后通过考马斯亮蓝染色，若SDS-PAGE染色结果表明IP样品中蛋白量较高且差异明显，质谱检测可分析出明显的蛋白差异从而鉴定相互作用蛋白，则可继续进行IP样品质谱送样检测。将蛋白条带用干净的刀片切下，装入EP管中及时送样。用于质谱检测的胶条样品大小要求胶条以 1 cm*1 cm 为宜（胶条过大容易导致酶解效率低，建议分成多份进行酶解）。送样时需加冰袋维持低温，否则应该优化和更改实验条件，重新制备样品后，再进行质谱检测。

百泰派克生物科技结合MALDI-TOF质谱系统与LC-MS/MS质谱系统，提供专业准确的蛋白胶点、胶条以及IP样品，CO-IP样品蛋白鉴定服务。可鉴定的样品包括但不限于：1D-SDS PAGE分离的蛋白胶条，2DE PAGE中的蛋白胶点，蛋白表达产物，免疫共沉淀（Co-IP）样品。只需要将您的实验目的告诉我们并寄送样品，百泰派克生物科技将会负责完成样品处理、上机分析、数据分析、项目报告等项目后续服务。