western blot技术

    蛋白印迹(Western Blot,WB)也称免疫印迹,是一种基于抗体的蛋白质分析技术。利用抗体-抗原的特异性相互作用可以在复杂的蛋白质混合物中识别感兴趣蛋白(目标蛋白质),以实现感兴趣蛋白的定性和半定量分析,在蛋白质表达水平、抗体活性、蛋白质相互作用以及蛋白质翻译后修饰分析中广泛应用。

    WB主要包括以下步骤:

    (1)样品分离:利用SDS-PAGE分离蛋白混合物;

    (2)转膜:将蛋白条带从凝胶转移到固相载体——例如硝酸纤维素薄膜(NC)上。固相载体可以吸附蛋白质,并保持电泳分离的蛋白质生物学活性不变。转移后的NC膜就称为一个印迹(blot);

    (3)标记鉴定:用目标蛋白的抗体(一抗)处理NC膜——只有待研究的蛋白质才能与一抗特异结合形成抗原抗体复合物,这样清洗除去未结合的一抗后,只有在目标蛋白的位置上结合着一抗。用一抗处理过的NC膜再用二抗处理,二抗是指一抗的抗体。通常,第二抗体带有特殊标记,当与合适的底物结合时,会产生可检测的荧光信号,信号强度与膜上的目标蛋白的丰度相关。

    通过以上步骤,可以捕获与一抗相互结合的感兴趣蛋白,用于判断感兴趣蛋白的存在与否以及一抗与感兴趣蛋白的相互作用分析;此外,还可根据荧光信号强度对目标蛋白进行半定量鉴定,用于蛋白质白表达水平分析。

    百泰派克生物科技基于蛋白印迹WB以及Thermo公司最新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC提供蛋白质分析服务技术包裹,包括蛋白质定性定量鉴定、蛋白质相互作用分析以及蛋白质翻译后修饰分析等,还可根据需求提供其他定制化检测方案,欢迎免费咨询。

    相关服务:
    Far-Western Blot分析
    蛋白质相互作用质谱分析
    免疫共沉淀法(CO-IP)结合质谱联用的蛋白互作分析
    GST融合蛋白Pull-down技术结合质谱联用的蛋白互作分析
    SILAC与免疫共沉淀结合质谱联用的蛋白互作分析
    蛋白鉴定
    翻译后修饰蛋白组分析
    蛋白质相互作用分析
    定量蛋白组分析

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