磷酸化蛋白和总蛋白wb怎样分析

    一、电泳和转膜

    首先,将样品通过SDS-PAGE电泳分离,然后将电泳完的样品转移到PVDF膜上。

     

    二、封闭

    转膜后,要先用5%脱脂牛奶或BSA在TBST缓冲液中封闭膜,防止非特异性结合。

     

    三、带抗体孵育

    封闭后,使用抗磷酸化蛋白或抗总蛋白抗体在4℃孵育过夜。具体的抗体选择要根据实验的需求来。

     

    四、洗膜和二抗孵育

    抗体孵育完成后,要用TBST缓冲液洗膜,并使用二抗进行孵育。

     

    五、洗膜和显影

    二抗孵育完成后,再次用TBST缓冲液洗膜,然后使用ECL显像液进行显影。

     

    六、分析

    最后,对显影后的结果进行分析。一般来说,磷酸化蛋白的灰度值需要用对应的总蛋白值进行归一化。

     

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    相关服务:

    磷酸化蛋白质组学

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