磷酸化蛋白和总蛋白wb怎样分析

一、电泳和转膜

首先，将样品通过SDS-PAGE电泳分离，然后将电泳完的样品转移到PVDF膜上。

 

二、封闭

转膜后，要先用5%脱脂牛奶或BSA在TBST缓冲液中封闭膜，防止非特异性结合。

 

三、带抗体孵育

封闭后，使用抗磷酸化蛋白或抗总蛋白抗体在4℃孵育过夜。具体的抗体选择要根据实验的需求来。

 

四、洗膜和二抗孵育

抗体孵育完成后，要用TBST缓冲液洗膜，并使用二抗进行孵育。

 

五、洗膜和显影

二抗孵育完成后，再次用TBST缓冲液洗膜，然后使用ECL显像液进行显影。

 

六、分析

最后，对显影后的结果进行分析。一般来说，磷酸化蛋白的灰度值需要用对应的总蛋白值进行归一化。

 

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