蛋白质分子量的测定可采用
SDS-PAGE(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis)是一种广泛用于确定蛋白质分子量,分离和纯化蛋白质的实验技术。该技术基于蛋白质在电场作用下穿过聚丙烯酰胺凝胶的速度与其分子量成反比的原理。
一、工作原理
1.SDS是一种强阴离子表面活性剂,可以将蛋白质分子线性化并赋予其负电荷。这使得蛋白质分子在电场作用下的迁移速度与其分子量成反比。
2.聚丙烯酰胺凝胶的孔隙大小决定了蛋白质的迁移速度,较大的蛋白质分子在凝胶中的迁移速度较慢。
二、获取电泳图片
样品可以是粗提液、细胞裂解液,或者纯化的蛋白质溶液。将样品与SDS样品缓冲混合后,煮沸5-10分钟使蛋白质充分线性化,并在电泳槽中运行一定时间。
三、解析电泳图片
1.电泳结束后,蛋白质会在凝胶中形成带状,分子量较大的蛋白质在凝胶顶部,分子量较小的蛋白质在凝胶底部。
2.通过与分子量标准进行对比,可以确定样品中的蛋白质的分子量。
四、应用
1.确定蛋白质分子量
通过SDS-PAGE电泳,可以确定未知蛋白质的分子量。
2.蛋白质纯化
SDS-PAGE电泳可以用于分离复杂的蛋白质混合物,对蛋白质进行纯化。
3.研究蛋白质的变性和重组
通过SDS-PAGE电泳,可以研究蛋白质的变性和重组。
4.蛋白质定量
通过对电泳带的灰度进行分析,可以定量分析蛋白质的含量。
五、优势
1.速度快
大部分SDS-PAGE分析只需几小时。
2.灵敏性和分辨率
SDS-PAGE分析提供了高灵敏性和高分辨率的结果。
3.简便
SDS-PAGE分析的步骤简单,操作容易。
4.无损
SDS-PAGE分析是一种无损分析方法,不会破坏蛋白质的结构。
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