测定蛋白质的方法及原理
1. Bradford法
Bradford法是一种快速、简单、灵敏的测定蛋白质浓度的方法。其原理是在酸性条件下,布拉德福特试剂中的考马斯亮蓝G-250染料与蛋白质的极性氨基酸残基(主要是精氨酸)形成络合物,导致染料从红棕色变为蓝色。通过测定吸光度,可以计算出蛋白质的浓度。
2. UV吸收法
UV吸收法是一种直接、无损的蛋白质测定方法。其原理是蛋白质中的芳香族氨基酸(酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸)和肽键在紫外区有吸光峰。在280nm的波长下,通过测定样品的吸光度,可以计算出蛋白质的浓度。
3. Lowry法
Lowry法是一种较为复杂,但灵敏度较高的蛋白质测定方法。其原理是在碱性条件下,蛋白质的肽键与酪氨酸、半胱氨酸、半胱氨酸等氨基酸残基通过Folin-Ciocalteu试剂还原铜离子,形成蓝色络合物。测定其在750nm处的吸光度,可以计算蛋白质的浓度。
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