百泰派克生物科技BTP客户案例：通过蛋白质谱鉴定分析多粘类芽孢杆菌果胶酸裂合酶活性最高的组分
期刊：Molecules；影响因子: 5.1098
原文链接：DOI: 10.3390/molecules23112774
研究对象：苎麻纤维、多粘类芽孢杆菌
研究目的：多糖裂合酶家族10（PL10）的酶在苎麻脱胶中的应用研究
研究手段：蛋白质谱鉴定等
研究内容及结论：苎麻纤维表面覆盖有一种胶样物质，限制了它在纺织工业中的应用。有研究表明，脱胶过程可以通过果胶酸裂合酶的酶催化来实现，与碱性脱胶相比酶法脱胶具有效率高、条件温和、对环境友好等优点。还没有研究PL10的果胶酸裂合酶在苎麻脱胶中的应用。该研究从多粘类芽孢杆菌KF-1分泌的酶提取物中筛选出一种新的PL10果胶酸裂合酶，并通过LC-MS/MS进行了蛋白质谱鉴定。基因克隆自KF-1的基因组DNA，并在大肠杆菌中表达。重组酶PpPel10a的预测Mr值为45.2 kDa，pI值为9.41。以聚半乳糖醛酸（PGA）为底物，确定了PpPel10a的最佳反应条件为50℃，pH 9.0。以PGA为底物的PpPel10a的Km、vmax和kcat值分别为0.12 g/L，289 μmol/min/mg和202.3 s-1。重组PpPel10a可降解柑橘果胶，产生不饱和单半乳糖醛酸和寡半乳糖醛酸。PpPel10a降低了PGA的粘度，且观察到单PpPel10a或PpPel10a与碱结合处理后，苎麻纤维的重量分别减轻了22.5%和26.3%。表明PpPel10有应用于植物纤维加工的潜力。
通过nanoLC-MS/MS蛋白质谱鉴定分析多粘类芽孢杆菌果胶酸裂合酶活性最高的组分，该服务由北京百泰派克生物科技提供。共鉴定到28个蛋白质，包括4个果胶酸裂合酶，1个果胶酯酶和23个非果胶降解酶。10个多肽片段搜库结果表明他们都属于四个果胶酸裂合酶家族，且分别属于PL家族1、3、9和10，其中属于PL10家族的多肽片段在LC-MS/MS分析中显示出最高强度。
参考文献：Zhao Y, Yuan Y, Zhang X, et al. Screening of a novel polysaccharide lyase family 10 pectate lyase from Paenibacillus polymyxa KF-1: cloning, expression and characterization[J]. Molecules, 2018, 23(11): 2774.
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