百泰派克生物科技BTP客户案例：利用Edman降解测序鉴定重组Est19基因的表达蛋白
期刊：Biomolecules；影响因子：6.1910
原文链接：DOI: 10.3390/ biom11111552
研究对象：一种新的激素敏感脂肪酶Est19
研究目的：对新的Est19进行表征
研究手段：蛋白质组学测序等
研究内容及结论：酯酶是一类重要的酶，具有广泛的工业应用。从南极假单胞菌中分离到一个新的激素敏感脂肪酶（HSL）家族，Est19。对E2-15进行鉴定、克隆和表达。该酶具有一个含有活性丝氨酸（S）的GESAG基序，位于高度保守的催化三联体Ser155、Asp253和His282残基中。在40℃下，Est19对pNPC6底物的催化效率（kcat/kM）为148.68 s−1 mM−1。 用天冬氨酸取代与关键催化丝氨酸并列的Glu154（E154→D）后，该酶的活性和催化效率降低了两倍，底物亲和度变化不大。野生型酶在10-60℃的温度范围内保持接近完全活性，而在0℃下保持约50%的活性。系统发育分析表明，Est19及其同源基因可能代表了HSL的一个新的亚家族。这种热稳定性和立体特异性表明，Est19酯酶可能在冷催化和手性催化中有应用价值。
利用Edman降解测序鉴定重组Est19基因的表达蛋白，该服务由北京百泰派克生物科技提供。SDS-PAGE结果显示，其分子量为~35 kDa，与理论分子量一致。Edman降解N-末端测序表明，在大肠杆菌中表达时没有第一个氨基酸残基Met1。
参考文献：Liu X, Zhou M, Xing S, et al. Identification and biochemical characterization of a novel hormone-sensitive lipase family esterase Est19 from the Antarctic bacterium Pseudomonas sp. E2-15[J]. Biomolecules, 2021, 11(11): 1552.
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