百泰派克生物科技BTP客户案例：利用N端Edman测序鉴定hNGF的NH2末端
期刊：World Journal of Microbiology and Biotechnology；影响因子: 4.2720
原文链接：DOI: 10.1007/s11274-020-02951-x
研究对象：小鼠
研究目的：hNGF在小鼠颌下腺中的表达研究
研究手段：N端Edman测序等
研究内容及结论：神经生长因子（NGF）是中枢和外周神经系统神经元生长和生存的重要营养因子。多年来，小鼠NGF（mNGF）已被用于治疗各种神经元和非神经元疾病。然而，人NGF（hNGF）在人细胞中的生物活性显著高于mNGF。利用CRISPR/Cas9系统，研究人员构建了在颌下腺中特异性表达hNGF的转基因小鼠。荧光免疫组化染色显示，这些小鼠成功产生hNGF，每克颌下腺产生0.8 mg。采用两步离子交换色谱法和一步尺寸排阻色谱法，从这些转基因小鼠的颌下腺中成功提取了纯度为99%的hNGF。并通过LC-MS/MS对纯化后的hNGF进行了验证。使用Edman降解法和基于LC-MS/MS的方法分析了hNGF的NH2端。结果表明，获得的hNGF失去了NH2端八肽（SSSHPIFH）。此外，所产生的hNGF对TF1细胞的繁殖有很强的促进作用。
利用Edman降解法对纯化的hNGF蛋白NH2端进行测序，该服务由北京百泰派克生物科技提供。测序结果显示纯化的hNGF失去了NH2末端的八肽。
参考文献：Gu Y, Cao H, Li F, et al. Production of functional human nerve growth factor from the submandibular glands of mice using a CRISPR/Cas9 genome editing system[J]. World Journal of Microbiology and Biotechnology, 2020, 36: 1-10.
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